Importância do padrão de fluorescência na interpretação do teste do FAN: o caso do padrão pontilhado fino denso / Relevance of the immunofluorescence pattern for interpretation of the ANA test: the case of the dense fine speckled pattern

A pesquisa de anticorpos contra antígenos celulares (FAN-HEp-2), historicamente conhecida como FAN (fator antinúcleo), tem passado por modificações metodológicas que exigem reflexão sobre suas características de sensibilidade e especificidade, para que haja uma adequada valorização dos resultados obtidos. Atualmente, o exame é marcado por elevada sensibilidade e questionável especificidade, resultando em elevado número de exames positivos em indivíduos não auto-imunes. O reconhecimento de que uma fração substancial da população apresenta o teste de FAN-HEp-2 reagente ocasiona a necessidade de busca de características que possam distinguir os testes positivos em pacientes com doença auto-imune daqueles observados em indivíduos não auto-imunes. Entre essas características, encontram-se o título da reação e o padrão de fluorescência observado. Em particular, deve-se ter em mente que o padrão de fluorescência é resultante do reconhecimento de diferentes estruturas celulares pelos anticorpos e, portanto, o padrão de fluorescência fornece uma indicação preliminar dos possíveis antígenos que estão sendo reconhecidos. Um exemplo emblemático é representado pelo padrão nuclear pontilhado fino denso (PFd). Inicialmente pesquisado por Ochs et al. (1984), em grupo clínico restrito de pacientes com cistite intersticial, estudos ulteriores demonstraram sua alta freqüência na prática laboratorial em indivíduos com diversas condições não auto-imunes. De fato, este padrão é um dos mais freqüentes entre indivíduos não auto-imunes com reação FAN-HEp-2 positiva. A presente revisão tem como objetivo fornecer elementos que permitam ao clínico exercitar uma interpretação crítica dos resultados de FAN-HEp-2, incluindo a análise do título e do padrão de fluorescência.

Determination of autoantibodies against cellular antigens (ANA-HEp-2) has undergone several methodological changes over the decades and for an appropriate evaluation of results requires reflection on its sensitivity and specificity properties. Currently the test is known to have high sensitivity and questionable specificity since it is frequently positive in a considerable number of non-autoimmune subjects. Awareness that a substantial portion of the population has a positive ANA-HEp-2 test demands that characteristics permitting to distinguish positive tests in autoimmune patients from positive tests in non-autoimmune subjects be identified. Among these characteristics are noteworthy the titer and the fluorescence pattern. In particular, one must bear in mind that the fluorescence pattern results from recognition by autoantibodies of distinct cellular structures and, therefore, the fluorescence pattern provides a preliminary indication of possible autoantigens targeted by the sera being tested. An emblematic example is the nuclear dense fine speckled pattern. It was originally studied by Ochs and collaborators in 1994 in a restricted number of patients with interstitial cystitis. Further studies demonstrated its frequent occurrence in laboratory practice in individuals with diverse non-autoimmune clinical conditions. Indeed, this pattern is one of the most frequently observed in non-autoimmune patients with an ANA-HEp-2 positive reaction. The present review intends to provide elements allowing the clinician to perform a critical interpretation of results of an ANA-HE-2 test, including analysis of the titer and the fluorescence pattern.

Análise crítica do teste de anticorpos antinúcleo (FAn) na prática clínica / Critical analysis of the antinuclear antibody test as tool in clinical practice

A pesquisa de anticorpos contra antígenos celulares, tradicionalmente denominada FAN (fator antinúcleo) ou FAN-HEp-2, tem apresentado contínua evolução que requer dos profissionais envolvidos uma acurada e constante revisão sobre os paradigmas que norteiam a interpretação dos resultados obtidos. Os avanços metodológicos ocasionaram expressivo aumento na sensibilidade do teste e conseqüente diminuição de sua especificidade. Isto se verifica pelo crescente número de exames positivos em indivíduos aparentemente hígidos. Este fato tem criado situações desconfortáveis e muitas vezes angustiantes, sendo necessário buscar elementos para auxiliar os profissionais envolvidos. Estudos criteriosos e a experiência têm nos ensinado que há características peculiares usualmente associadas aos auto-anticorpos observados em pacientes auto-imunes e em indivíduos não auto-imunes. A presente revisão fornece uma abordagem sobre os pontos importantes para a correta valorização dos achados do teste do FAN-HEp-2 e que possam auxiliar na identificação de pacientes com doenças auto-imunes. Discute-se a importância do título e do padrão de imunofluorescência na valorização de um teste positivo e no desdobramento da pesquisa de auto-anticorpos específicos. Indivíduos não auto-imunes usualmente apresentam FAN-HEp-2 em títulos baixos, enquanto pacientes auto-imunes, geralmente, títulos médios ou altos. Entretanto, observam-se freqüentes exceções em ambos os contextos. Os padrões de fluorescência nucleares pontilhado grosso e homogêneo quase sempre se associam a um contexto de auto-imunidade sistêmica. Por outro lado, o padrão nuclear pontilhado fino denso é um dos mais freqüentemente observados em pessoas não auto-imunes com exame positivo de FAN-HEp-2. O Consenso Nacional para Padronização dos Laudos de FAN-HEp-2 tem desempenhado importante papel na melhoria da interpretação do exame de FAN-HEp-2 em nosso país. Finalmente, há que se considerar os possíveis e diversos...

Due to its continuous evolving process the fluorescent antinuclear antibody test (ANA-HEp-2) has required constant update efforts from personal involved in performing and interpreting its results. The methodological advances have brought up a considerable improvement in the test's sensitivity and consequently a decrease in its specificity. This has resulted in an increasing number of positive tests in apparently healthy subjects. This fact contributes to embarrassing situations and implies in the necessity to seek for elements to help the involved professionals. Well-conducted studies and experience have shown that there are some peculiar features associated with the auto-antibodies in patients with autoimmune diseases that are not present in those observed in healthy subjects. The present review brings an approach on the most important points to be considered in the analysis and evaluation of an ANA test that might help the identification of patients with autoimmune disease. Titer and immunofluorescence pattern are important parameters in the evaluation of the significance of a positive ANA-HEp2 test and in the reflex demand for further tests for specific autoantibodies. In general non-autoimmune individuals present low titer ANA-HEp-2 and patients with systemic autoimmune diseases present moder ate or high titer ANA-HEp-2 tests. However, exceptions to this are normally observed in both contexts. The homogeneous and coarse speckled nuclear patterns are almost exclusively observed in patients with systemic autoimmunity. On the other hand, the nuclear dense fine speckled pattern is one of the most frequently observed patterns in non-autoimmune individuals with a positive ANA-HEp-2 test. The basic concepts of the National Consensus on Standardization of ANA-HEp-2 Report have helped Brazilian rheumatologists and pathologists in the correct interpretation of the great diversity of ANA-HEp-2 immunofluorescence patterns. Finally, it is important...

Auto-anticorpos na esclerose sistêmica (ES) / Autoantibody in the systemic sclerosis (SS)

A esclerose sistêmica (ES) é uma enfermidade inflamatória crônica idiopática, cujo principal indício de vínculo com a auto-imunidade é a presença de auto-anticorpos na maior parte dos pacientes. Pelo teste de imunofluorescência indireta em células HEp-2, observa-se reatividade predominantemente contra o nucléolo e o núcleo, sendo que títulos de anticorpos antinucléolo acima de 1/640 são fortemente sugestivos de ES. Alguns desses auto-anticorpos apresentam alta especificidade para a ES, sendo considerados marcadores diagnósticos dessa enfermidade. São exemplos os anticorpos anti-Scl-70, antifibrilarina e anti-RNA polimerase I. Outros apresentam interessantes associações com manifestações específicas da ES, como os anticorpos anticentrômero, associados às formas limitadas, os anticorpos anti-RNA polimerase III, associados ao extenso comprometimento da pele, e os anticorpos anti-To/Th, associados às formas limitadas com propensão ao desenvolvimento de hipertensão pulmonar. Algumas dessas associações estão bem estabelecidas em diversos estudos, de diferentes grupos de pesquisadores. Outras, entretanto, devem ser vistas com cautela, pois a exigüidade de casos disponíveis para estudo pode ensejar conclusões preliminares e não acuradas. A detecção de anticorpos anticentômero por técnica de IFI e anti-Scl-70 por imunodifusão dupla ou por ELISA está disponível nos principais laboratórios clínicos capacitados na área de auto-imunidade. O mesmo não se aplica para a maior parte dos demais auto-anticorpos associados à ES. Espera-se que, com a implementação rotineira de técnicas para detecção desses outros auto-anticorpos, o real significado clínico dos mesmos venha a ser melhor conhecido.

II Consenso Brasileiro de fator antinuclear em células HEp-2. Definições para a padronização da pesquisa de auto-anticorpos contra constituintes do núcleo (FAN HEp-2), nucléolo, citoplasma e aparelho mitótico e suas associações clínicas / II Brazilian Consensus on antinuclear antibodies in HEp-2 cells. Definitions for standardization of autoantibody testing against the nucleus (ANA HEp-2), nucleolus, cytoplasm and mitotic apparatus, as wel as its clinical associations

Objetivo: O Segundo Consenso Brasileiro de Fator Antinuclear (FAN) em Células HEp-2 ratificou os algoritmos de decisão para leitura dos padrões do FAN na imunofluorescência indireta vistos na primeira edição do Consenso Brasileiro, adicionando ainda um novo algoritmo relacionado com os padrões mistos. Métodos: Tendo em vista a habilidade do teste em detectar auto-antígenos nos distintos compartimentos celulares, e não apenas no núcleo, propõe-se novas denominações para este exame laboratorial. Resultados e Conclusões: Como novas denominações algumas sugestões foram igualmente aceitas, dentro do tema "pesquisa de aut-anticorpos contra constituintes do núcleo (FAN HEp-2), nucléolo, citoplasma e aparelho mitótico". Foram abordadas as principais relevâncias clínicas com os padrões de FAN descritos, facilitando o melhor uso do ensaio pelo médico

Comparison of semi-automatized assays for anti-T. gondii IgG detection in low-reactivity serum samples: importance of the results in patient counseling

Toxoplasmosis is a disease which can cause severe congenital infection and is normally diagnosed by the detection of T. gondii specific antibodies in the serum of infected patients. Several different tests allow to distinguish recent from past infections and to quantify anti-T. gondii specific IgG, and the results can be used as markers for immunity. In the present study, we compare the performance of two different methodologies, the Elfa (bioMérieux S.A) and the Meia (Abbott Laboratories) in detecting T. gondii specific IgG in low-reactivity sera. Of 76 analyzed samples, three presented discrepant results, being positive in the Abbott AxSYM Toxo IgG assay, and negative in the bioMérieux Vidas Toxo IgG II assay. By using other tests, the three sera were confirmed to be negative. The results are discussed in the context of their importance for patient management, especially during pregnancy

Enzyme-linked immunosorbent assay for semi-quantitation of anti-Ro/SS-A antibodies in autoimmune rheumatic diseases

Anticorpos anti-Ro/SS-A sao observados no soro de pacien tes com diferentes doenças reumáticas, com maior prevalência no lúpus eritemato so sistêmico, síndrome de SjÖgren primária e lúpus neonatal com bloqueio cardía co congênito. Várias técnicas com diferentes níveis de sensibilidade e especifi cidade têm sido utilizadas para detecçao de anticorpos anti-Ro/SS-A. O objetivo deste estudo foi desenvolver um ensaio imunoenzimático (ELISA) para detecçao e semiquantificaçao de anticorpos anti-Ro/SS-A. Cromatografia de imunoafinidade anti-Ro/SS-A foi utilizada para purificar o antígeno Ro/SS-A de baço de vitelo. Na eletroforese em gel de poliacrilamida, o antígeno purificado migrou como bandas de 60 e 52 kDa e foi utilizado como substrato no ELISA. Por este período, anti corpos anti-Ro/SS-A foram detectados em 35,8 por cento (43/120) dos pacientes com diferentes doenças reumáticas, em contraste com 29,2 por cento quando utili zada imunodifusao dupla (IDD). Anticorpos anti Ro/SS-A nao foram detectados nos 30 controles normais, tanto no ELISA como na IDD. ELISA para detecçao de anticorpos anti-RO/SS-A mostrou ser mais vantajoso que a IDD, devido à sua maior sensi bilidade, sua capacidade de fornecer resultados semiquantitativos e a possibili dade de ser adaptado como procedimento semi-autorizado

Sequential estimation of serum C2 complement in different stages of systemic lupus erythematosus

Quarenta e nove pacientes com lúpus eritematoso sistêmico foram prospectivamente e sequencialmente classificados quanto ao grau de atividade da doença. Os níveis séricos de CH50, C3, C4 e C2 foram dosados em diversos momentos, de modo a permitir uma observaçao dinâmica do comportamento desses parâmetros ao longo do processo de mudança de atividade de doença. C2 esteve diminuído na maioria dos pacientes com atividade precoce de doença, enquanto C3, C4 e CH50 ainda apresentavam níveis normais em vários dos pacientes nessa fase. Por outro lado, C2 persistiu abaixo dos níveis normais em vários dos pacientes em processo de saída de atividade da doença ou em remissao clínica recente. C3 foi o melhor parâmetro para detectar a mudança para remissao clínica, seguido de perto pelo CH50. C4 teve o pior desempenho tanto em relaçao à transiçao para atividade quanto na transiçao para remissao da doença. Este é o primeiro relato do significado clínico da dosagem de C2 no acompanhamento de pacientes lúpicos. Os resultados sugerem que a dosagem combinada de C2 e C3 ou CH50 possa ser a melhor abordagem para detecçao precoce de atividade de doença e de remissao clínica, respectivamente

Anticorpo sérico e antigliadina no diagnóstico e seguimento da doença celíaca / Serum antigliadin antibodies in the diagnosis and follow-up of celiac disease

Foram estudadas prospectivamente, no período de 1985 a 1990, 236 crianças com suspeita de má-absorçäo, encaminahdas para biopsia de intestino delgado e prova de absorçäo do D-Xilose. Foram colhidas uma ou mais amostras de sangue para dosagem de anticorpo antigliadina. O objetivo do trabalho foi a avaliaçäo do comportamento dos anticorpos antigliadina classes IgG e IgA no diagnóstico diferencial entre doença celíaca e outras causas de má-absorçäo e no acompanhamento de pacientes celíacos, nas diferentes fases do preenchimento dos critérios diagnósticos. Foram estudadas 20 crianças com doença celíaca confirmada por três biopsias de intestino delgado; 12 crianças com suspeita de doença celíaca com duas biopsias intestinais, antes e um ano após retirada do glúten; 106 crianças com enteropatia ambiental; 45 crianças com diarréia protraída e 56 crianças com baixa estatura. Os anticorpos foram úteis no diagnóstico diferencial entre doença celíaca e outras enteropatias, sendo o da classe IgG mais sensível e o da classe IgA mais específico no diagnóstico. No seguimento dos pacientes celíacos os títulos de anticorpo foram significantemente mais altos na vigência de glúten na dieta do que na fase de restriçäo, demonstrando ser bom indicador da presença de lesäo intestinal nesses pacientes

Critical appraisal of the pattern of antinuclear antibodies (ANA) testing requested over a six month period at the Escola Paulista de Medicina (EPM, Säo Paulo

In order to evaluate the pattern of ANA testing solicitation, 506 patients with ANA testing requested from July 1st. 1988 to December, had their charts reviewed. These patients, randomly selected, were regularly attending the outpatient clinic at the "Escola Paulista de Medicina" (EPM). 289 patients were followed up at the Rheumatology Division (group A) and 217 patients at other clincial divisions at EPM (group B). The disease that most frequently motivated the request for ANA test were: group A - SLE (22.5 per cents), RA (18.1 per cents), undefined arthropathies (6.2 per cents), PSS and CREST (5.9 per cents) and Raynaud phenomena (5.5 per cents); and group B - rheumatic diseases (24.4 per cents), nephropathies (17.1 per cents), neuropathies (16.6 per cents), dermopathies (7.8 per cents), hemopathies (4.6 per cents), pneumopathies (4.2 per cents) and ophtalmopathies (3.7 per cents). The positivity of ANA test in groups A and B was 32.9 per cents and 17.5 per cents respectively. 92 SLE patients were clinically diagnosed. The positivity of Ana and anti-dsDNA tests in this group was respectively 85.1 per cents and 26.6 per cents. The sensitivity and specificity of 1982 ARA revised criteria were 94.7 per cents and 99 per cents respectively. The likelihood ratio (LR) of a positive or a negative test was established for this population. LR of a positive test was 6.5 while for a negative test it was 0.17. The ANA test, although lacking specificity, has been commonly requested by different specialities in order to practically rule-out the diagnosis of some connective rheumatic diseases. Immunofluorescence technique (IF) using antibodies conjugated with fluorchromes was first described by Coons et al. in 1941 (4). This method has been used as an important diagnostic tool in routine laboratory tests ever since. Anew technique using indirect immunofluorescence for detection of antinuclear antibodies (ANA) was developed by Friou in 1957 (5). This method has been gaing importance since then, due to the presence of antoantibodies in a variety of neoplastic, infectious, autoimmune and, particularly, connective tissue diseases. In 1960, the study of Anderson (1) led to the description of a new set of autoantibodies, which recognized extractable nuclear and citoplasmatic antigens in a great percentage of cases, but were not detected by indirect IF. Nowadays, these autoantibodies can be identified by immunodifusion, immunoenzymatic, radioimmune or immunoblot techniques...

Síndrome de Bloom familiar associada a neuroblastoma / Familial Bloom's syndrome associated with neuroblastoma

A SB é entidade rara, de herança autossômica recessiva e caracterizada por baixa estatura, sensibilidade solar e eritema malar telangiectásico. E classificado como doença de quebra cromossômica e imunodeficiência primária mista e maior incidência de neoplasias têm sido relatadas em associaçäo. Apresentamos dois irmäos com SB e imunodeficiência associada. As crianças, ambas do sexo masculino, tinham cinco anos (A) e quatro anos (B) de idade, quando do diagnóstico. O paciente A tinha história de diarréia crônica, otite supurada, rinite purulenta, conjuntivite e piodermite recorrentes. O paciente B, internado por massa abdominal, teve diagnóstico de neuroblastoma bilateral e näo apresenta quadro infecciosos de repetiçäo. Foi submetido a ressecçäo tumoral e quimioterapia, apresentando a seguir monilíase oral, gengivoestomatite herpética e abscessos cutâneos. Os dois pacientes revelaram as características clínicas da SB. A avaliaçäo imunológica, näo observamos alteraçöes no sistema de complemento. Os níveis de IgG, IgA, IgM e IgA salivar foram, respectivamente de: 455mg/dl, 20mg/dl e 0,6mg/dl para A e 400mg/dl, 15mg/dl, 20mg/dl e 0,2mg/dl para B. Os dois apresentaram títulos de anticorpos antipólio (1, 2 e 3) e iso-hemaglutinas antiA em títulos baixos. A tipagem dos linfócitos T, foram observados, para A: OKT3 = 66%, OKT4 = 33,1%, OKT8 = 32,9% e relaçäo OKT4/4 = 1,0 e para B OKT4 = 70%, OKT4 = 32,5%, OKT8 = 34% e relaçäo OKT 4/8 = 1,0. A cultura de linfócitos estimulada com PHA foi...

Cell mediated immunity in patients with Virchovian hanseniasis before and after tretament with transfer factor

A proposiçao do trabalho foi a de estudar as manifestaçoes da imunidade celular medida por celulas (CMI), in vivo e in vitro, em hansenianos. Mitsuda-negativos antes e apos o tratamento. Foi constituido um grupo homogeneo de 15 pacientes obedecendo aos seguintes criterios: paientes Mitsuda-negativos, do sexo masculino, de 18 a 40 anos, virgens de qualquer tipo de tratamento anterior e com tempo de doença relatado em torno de 5 anos. Foram formados 3 grupos experimentais definidos como segue: Grupo I - pacientes que recebiam 100 mg de sulfona diariamente e 1 ml de salina, por via subcutanea, como placebo, duas vezes por semana; Grupo II - pacientes que receberiam 100 mg de sulfona diariamente e 1 ml de fator de transferencia (FT), preparado a partir de linfocitos obtidos de baço humano, por via subcutanea, duas vezes por semana; Grupo III - pacientes que receberiam um comprimido como placebo diariamente e 1 ml de FT por via subcutanea, duas vezes por semana. Os pacientes foram submetidos aos seguintes exames: anamnese e exame clinico dermatologico, indice baciloscopico (IB) e morfologico (IM), histopatologico de pele e de linfonodos inguinais, determinaçao de linfocitos T e B no sangue periferico e cultura de linfocitos com estimulo pela fitohemaglutinina (PHA) no 3º e 14º dias. Apos a coleta de todo o material, o esquema terapeutico foi iniciado e mantido por 8 semanas consecutivas...